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方案概述

前言：

稳心颗粒是我国批准的第一个治疗心律失常的专利中成药新药，现为国家基本药物目录、国家医保品种目录、中国药典收录品种。稳心颗粒主要是由党参、黄精、三七、琥珀、甘松等组成，党参、黄精可以益气养阴，三七活血化瘀通络，琥珀可以镇心安神，甘松理气止痛，这些药物一起应用可以使患者气阴两虚得以滋养，血脉瘀阻可以得到通畅。常用于治疗气阴两虚，心脉瘀阻所致的心悸不宁，气短乏力，胸闷胸痛，室性早搏，房性早搏等。据最新的《国家药典委员会关于稳心颗粒国家药品标准修订草案的公示》，新标准草案修订了2020版药典含量测定的梯度洗脱方法，含量限度未作修改。

本篇文章参考了最新的《国家药典委员会关于稳心颗粒国家药品标准修订草案的公示》中修订的含量测定项下高效液相色谱法色谱条件，采用英国365集团官网高效液相色谱仪LC3200系列配置紫外检测器对稳心颗粒进行检测。实验结果显示，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1色谱峰的理论塔板数均高于4000，满足实验分析需求。对照品溶液重复进样6次，三七皂苷R1的保留时间RSD值为0.125%，峰面积RSD值为0.499%，人参皂苷Rg1的保留时间RSD值为0.126%，峰面积RSD值为0.198%，人参皂苷Rb1的保留时间RSD值为0.165%，峰面积RSD值为0.300%，重复性较好。三七皂苷R1检出限为0.210μg/mL，定量限为0.699μg/mL，人参皂苷Rg1检出限为0.220μg/mL，定量限为0.733μg/mL，人参皂苷Rb1检出限为0.399μg/mL，定量限为1.329μg/mL。取稳心颗粒（无蔗糖）作为测试样品，根据各标准品色谱峰的保留时间进行定性，对稳心颗粒（无蔗糖）样品进行检测。结果显示，稳心颗粒（无蔗糖）样品每袋含三七以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总量为44.478mg，满足新标准中不得少于17.0mg的要求。说明了该方法配备英国365集团官网LC3200系列仪器满足对稳心颗粒的检测需求。

关键词：稳心颗粒；高效液相色谱法；紫外检测器；含量测定。

1.实验方法

1.1 仪器配置

表1 高效液相色谱系统配置清单

序号	名称	数量
1	LC3200系列高效液相色谱仪	1
2	P3200B二元高压梯度泵	1
3	UV3200 紫外-可见光检测器	1
4	CT3200全温度柱温箱	1
5	AS3200全自动进样器	1

1.2 实验材料及辅助设备

三七皂苷R1标准品；

人参皂苷Rg1标准品；

人参皂苷Rb1标准品;

甲醇：色谱纯；

乙腈：色谱纯；

分析天平；

微孔滤膜：孔径0.22μm；

超声波清洗机。

1.3 测试条件

表2 色谱条件清单

色谱条件清单
色谱柱	诺谱C18色谱柱
流速	1 mL/min
柱温	30℃
检测波长	203 nm
进样量	10 μL
流动相A	乙腈
流动相B	水

表3 梯度洗脱程序表

时间 / min	A / %	B / %
0	16	84
12	19	81
35	24	76
38	28	72
60	31	69
70	43	57

1.4 溶液配制

1.4.1 80%甲醇

精确量取80mL甲醇，置于100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，混匀即可。

1.4.2对照品溶液

取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加 80%甲醇制成每1ml 含三七皂苷R1 0.04mg、人参皂苷Rg1 0.15mg、人参皂苷Rb1 0.10mg 的混合溶液，摇匀，即得。

1.4.3对照品检出限溶液

精密吸取对照品溶液1mL，置于50mL容量瓶中，加入80%甲醇定容至刻度，摇匀，即得。

2.结果与讨论

2.1 系统适用性

图1 对照品溶液（20μg/mL）色谱图

表4系统适用性溶液色谱参数

化合物名	保留时间（min）	峰面积	理论塔板数
三七皂苷R1	28.055	155.128	77886
人参皂苷Rg1	32.464	580.368	95910
人参皂苷Rb1	63.742	223.801	233391

说明：由上述谱图可见，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1色谱峰的理论塔板数均高于4000，满足实验分析需求。

2.2 重复性

图2 对照品溶液中三七皂苷R1重复性色谱图

表5 对照品溶液中三七皂苷R1重复性色谱参数

序号	保留时间	峰面积	理论塔板数
1	28.055	155.128	77886
2	28.100	155.292	78165
3	28.004	155.409	77287
4	28.066	156.838	77976
5	28.089	156.117	78408
6	28.038	156.852	78091
平均	28.059	155.939	N/A
RSD(%)	0.125	0.499	N/A

图3 对照品溶液中人参皂苷Rg1重复性色谱图

表6 对照品溶液中人参皂苷Rg1重复性色谱参数

序号	保留时间	峰面积	理论塔板数
1	32.464	580.368	95910
2	32.516	581.088	96527
3	32.405	581.141	95198
4	32.481	583.072	95988
5	32.489	582.906	96954
6	32.428	582.724	96664
平均	32.464	581.883	N/A
RSD(%)	0.126	0.198	N/A

图4 对照品溶液中人参皂苷Rb1重复性色谱图

表7对照品溶液中人参皂苷Rb1重复性色谱参数

序号	保留时间	峰面积	理论塔板数
1	63.742	223.801	233391
2	63.778	223.849	233251
3	63.487	224.617	234838
4	63.698	225.321	238334
5	63.645	224.294	235905
6	63.604	225.298	239222
平均	63.659	224.530	N/A
RSD(%)	0.165	0.300	N/A

说明：对照品溶液重复进样6次，三七皂苷R1的保留时间RSD值为0.125%，峰面积RSD值为0.499%，人参皂苷Rg1的保留时间RSD值为0.126%，峰面积RSD值为0.198%，人参皂苷Rb1的保留时间RSD值为0.165%，峰面积RSD值为0.300%，重复性较好。

2.3 检出限

图5 对照品检出限溶液色谱图

表8 对照品检出限溶液色谱参数

化合物名	保留时间	峰面积	理论塔板数	信噪比	检出限（μg/mL）	定量限（μg/mL）
三七皂苷R1	28.048	2.854	76024	11.452	0.210	0.699
人参皂苷Rg1	32.403	10.481	97738	40.929	0.220	0.733
人参皂苷Rb1	63.697	4.913	278322	15.044	0.399	1.329

说明：以信噪比（S/N）为3确定检出限（LOD），三七皂苷R1检出限为0.210μg/mL，人参皂苷Rg1检出限为0.220μg/mL，人参皂苷Rb1检出限为0.399μg/mL。以信噪比（S/N）为10确定定量限（LOQ），三七皂苷R1定量限为0.699μg/mL，人参皂苷Rg1定量限为0.733μg/mL，人参皂苷Rb1定量限为1.329μg/mL。

2.4 样品测试

取稳心颗粒（无蔗糖）样品适量，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 80%甲醇 25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率 500W，频率 40kHz）45分钟，取出，放冷，再称定重量，用 80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，精密吸取供试品溶液 10μl，注入液相色谱仪，测定。

图6 稳心颗粒（无蔗糖）样品色谱图

表9 稳心颗粒（无蔗糖）样品各色谱峰色谱参数

化合物名	保留时间	峰面积	理论塔板数	浓度（μg/mL)	每袋含量（mg)
三七皂苷R1	28.014	137.763	78759	35.338	44.478
人参皂苷Rg1	32.412	563.536	96856	145.270
人参皂苷Rb1	63.599	393.408	232760	175.214

注：稳心颗粒（无蔗糖）每袋5g。

说明：根据各标准品色谱峰的保留时间进行定性，对稳心颗粒（无蔗糖）样品进行检测。结果显示，稳心颗粒（无蔗糖）样品每袋含三七以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总量为44.478mg，满足新标准中不得少于17.0mg的要求。

2.5 注意事项

在制备相关溶液时需要注意佩戴好实验室防护用品。

3.结论

本篇文章参考了最新的《国家药典委员会关于稳心颗粒国家药品标准修订草案的公示》中修订的含量测定项下高效液相色谱法色谱条件，采用英国365集团官网高效液相色谱仪LC3200系列配置紫外检测器进行检测。实验结果显示，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1色谱峰的理论塔板数均高于4000，满足实验分析需求。对照品溶液重复进样6次，三七皂苷R1的保留时间RSD值为0.125%，峰面积RSD值为0.499%，人参皂苷Rg1的保留时间RSD值为0.126%，峰面积RSD值为0.198%，人参皂苷Rb1的保留时间RSD值为0.165%，峰面积RSD值为0.300%，重复性较好。三七皂苷R1检出限为0.210μg/mL，定量限为0.699μg/mL，人参皂苷Rg1检出限为0.220μg/mL，定量限为0.733μg/mL，人参皂苷Rb1检出限为0.399μg/mL，定量限为1.329μg/mL。取稳心颗粒（无蔗糖）作为测试样品，根据各标准品色谱峰的保留时间进行定性，对稳心颗粒（无蔗糖）样品进行检测。结果显示，稳心颗粒（无蔗糖）样品每袋含三七以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总量为44.478mg，满足新标准中不得少于17.0mg的要求。说明了该方法配备英国365集团官网LC3200系列仪器满足对稳心颗粒的检测需求。

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