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方案概述

前言：

藤黄健骨丸是由熟地黄、鹿衔草、骨碎补（烫）、淫羊藿、鸡血藤、肉苁蓉、莱菔子（炒）等七味中药组成的经典复方制剂，其组方以补肾为本、治骨为标，通过补益肝肾、活血通络实现“补肾、活血、止痛”的核心功效。现代药理学研究证实，该药具有改善血液流变学、抗炎镇痛及抗骨质增生等作用，临床广泛用于肥大性脊椎炎、颈椎病、增生性关节炎等骨科疾病的治疗。据最新的《国家药典委员会关于藤黄健骨丸国家药品标准草案的公示》，新标准草案新增了朝藿定C和淫羊藿苷的高效液相色谱含量测定项，通过检测藤黄健骨丸中淫羊藿苷（主要活性成分）和朝藿定C（质量控制指标成分）的含量，可以更精准地反映药材质量与制剂工艺稳定性。

本篇文章参考了最新的《国家药典委员会关于藤黄健骨丸国家药品标准草案的公示》中修订的含量测定项下高效液相色谱法色谱条件，采用英国365集团官网高效液相色谱仪LC3200系列配置DAD检测器对藤黄健骨丸样品中朝藿定C和淫羊藿苷进行检测。实验结果显示，朝藿定C、淫羊藿苷色谱峰的理论塔板数均高于10000，满足实验分析需求。对照品溶液（30μg/mL）重复进样6次，朝藿定C的保留时间RSD值为0.223%，峰面积RSD值为0.243%，淫羊藿苷的保留时间RSD值为0.219%，峰面积RSD值为0.212%，重复性较好。朝藿定C检出限为0.0098μg/mL，定量限为0.0328μg/mL；淫羊藿苷检出限为0.0088μg/mL，定量限为0.0292μg/mL。取藤黄健骨丸作为测试样品，根据对照品溶液朝藿定C和淫羊藿苷标准品色谱峰的保留时间进行定性，对藤黄健骨丸样品中朝藿定C和淫羊藿苷进行检测。结果显示，本品每丸（每丸重3.5 g）含淫羊藿以朝藿定C和淫羊藿苷的总量计，得4.347 mg，满足新标准中大于3.0 mg的要求。说明了该方法配备英国365集团官网LC3200系列仪器满足对藤黄健骨丸药材中朝藿定C和淫羊藿苷含量检测需求。

关键词：朝藿定C；淫羊藿苷；高效液相色谱法；DAD检测器；藤黄健骨丸。

1.实验方法

1.1 仪器配置

表1 高效液相色谱系统配置清单

序号	名称	数量
1	LC3200系列高效液相色谱仪	1
2	P3210Q 四元低压梯度泵	1
3	DAD3260 二极管阵列检测器	1
4	CT3200全温度柱温箱	1
5	AS3200全自动进样器	1

1.2 实验材料及辅助设备

朝藿定C标准品；

淫羊藿苷标准品；

甲醇：色谱纯；

乙腈：色谱纯；

分析天平；

微孔滤膜：孔径0.22μm；

超声波清洗机。

1.3 测试条件

表2 实验色谱条件

实验色谱条件
色谱柱	诺谱Nova Atom SC18色谱柱
流速	1.0mL/min
柱温	35℃	检测波长	270nm
进样量	20μL
流动相	A：乙腈，B：水，C：甲醇

表3 梯度洗脱程序表

时间 / min	A / %	B / %	C/ %
0	22	78	0
6	22	78	0
7	27	68	5
21	27	68	5
22	22	78	0
45	22	78	0

1.4 溶液配制

1.4.1 50%甲醇

取50mL甲醇置于100mL容量瓶中，加入水稀释至刻度，充分混匀，即可。

1.4.2 对照品溶液（30μg/mL）

取淫羊藿苷对照品、朝藿定C对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL各含30μg的混合溶液，即可。

2.结果与讨论

2.1系统适用性

图1 对照品溶液（30μg/mL）色谱图

表4 系统适用性溶液色谱参数

化合物名	保留时间（min）	峰面积	理论塔板数
朝藿定C	16.774	1545.848	39776
淫羊藿苷	18.308	1981.081	37252

说明：由上述谱图可见，朝藿定C、淫羊藿苷色谱峰的理论塔板数均高于10000，满足实验分析需求。

2.2 重复性

图2 对照品溶液（30μg/mL）重复性色谱图

表5 组分朝藿定C的重复性色谱参数

序号	组分	保留时间	峰面积	理论塔板数
1	朝藿定C	16.774	1545.848	39776
2		16.724	1543.658	39766
3		16.714	1543.012	39559
4		16.704	1548.749	39715
5		16.674	1549.325	39569
6		16.674	1552.849	39433
平均	N/A	16.711	1547.240	N/A
RSD（%）	N/A	0.223	0.243	N/A

表6 组分淫羊藿苷的重复性色谱参数

序号	组分	保留时间	峰面积	理论塔板数
1	淫羊藿苷	18.308	1981.081	37252
2		18.261	1991.110	37103
3		18.248	1987.723	37055
4		18.231	1989.501	37351
5		18.204	1990.819	36937
6		18.201	1993.044	36940
平均	N/A	18.242	1988.880	N/A
RSD（%）	N/A	0.219	0.212	N/A

说明：对照品溶液（30μg/mL）重复进样6次，朝藿定C的保留时间RSD值为0.223%，峰面积RSD值为0.243%；淫羊藿苷的保留时间RSD值为0.219%，峰面积RSD值为0.212%，重复性较好。

2.3 检出限

图3 对照品溶液（1.5μg/mL）色谱图

表7 对照品溶液（1.5μg/mL）色谱参数

化合物名

保留时间

峰面积

理论塔板数

信噪比

检出限

（μg/mL）

定量限

（μg/mL）

朝藿定C

16.648

71.024

39572

457.066

0.0098

0.0328

淫羊藿苷

18.171

89.031

37354

514.078

0.0088

0.0292

说明：以信噪比（S/N）为3确定检出限（LOD），朝藿定C检出限为0.0098μg/mL，淫羊藿苷检出限为0.0088μg/mL。以信噪比（S/N）为10确定定量限（LOQ），朝藿定C定量限为0.0328μg/mL，淫羊藿苷定量限为0.0292μg/mL。

2.4 样品测试

取藤黄健骨丸样品适量，剪碎，混匀，取约1g，精密称定，置乳钵中，用50%甲醇 45 mL分次研磨，转移至 50 mL量瓶中，超声处理（功率500W，频率40kHZ）50分钟，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。

图4 藤黄健骨丸样品色谱图

表8 藤黄健骨丸样品中朝藿定C、淫羊藿苷组分色谱峰色谱参数

化合物名	保留时间	峰面积	理论塔板数	浓度（μg/mL）	以每丸计总量（mg）
朝藿定C	16.658	683.560	40047	13.27	4.35
淫羊藿苷	18.178	764.010	37796	11.57	4.35

说明：根据对照品溶液朝藿定C和淫羊藿苷标准品色谱峰的保留时间进行定性，对藤黄健骨丸样品中朝藿定C和淫羊藿苷进行检测。结果显示，本品每丸（每丸重3.5 g）含淫羊藿以朝藿定C和淫羊藿苷的总量计得4.35 mg，满足新标准中大于 3.0 mg的要求。

2.5 注意事项

在制备相关溶液时需要注意佩戴好实验室防护用品。

3.结论

本篇文章参考了最新的《国家药典委员会关于藤黄健骨丸国家药品标准草案的公示》中修订的含量测定项下高效液相色谱法色谱条件，采用英国365集团官网高效液相色谱仪LC3200系列配置DAD检测器对藤黄健骨丸样品中朝藿定C和淫羊藿苷进行检测。实验结果显示，朝藿定C、淫羊藿苷色谱峰的理论塔板数均高于10000，满足实验分析需求。对照品溶液（30μg/mL）重复进样6次，朝藿定C的保留时间RSD值为0.223%，峰面积RSD值为0.243%；淫羊藿苷的保留时间RSD值为0.219%，峰面积RSD值为0.212%，重复性较好。朝藿定C检出限为0.0098μg/mL，定量限为0.0328μg/mL；淫羊藿苷检出限为0.0088μg/mL，定量限为0.0292μg/mL。取藤黄健骨丸作为测试样品，根据对照品溶液朝藿定C和淫羊藿苷标准品色谱峰的保留时间进行定性，对藤黄健骨丸样品中朝藿定C和淫羊藿苷进行检测。结果显示，本品每丸（每丸重3.5 g）含淫羊藿以朝藿定C和淫羊藿苷的总量计，得4.35 mg，满足新标准中大于 3.0 mg的要求。说明了该方法配备英国365集团官网LC3200系列仪器满足对藤黄健骨丸药材中朝藿定C和淫羊藿苷含量检测需求。

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