首页

方案概述

前言：

低聚半乳糖（GOS）是一种天然的功能性低聚糖，分子结构一般为在半乳糖或葡萄糖分子上连接1～7个半乳糖基，聚合度从2～8不等，在人体肠道内可被双歧杆菌和乳酸杆菌等肠道益生菌利用，促进肠道益生菌的生长和增殖。GOS在母乳中含量丰富，可以有效促进婴儿体内双歧杆菌的增殖，还具有改善矿物质元素吸收、预防便秘、增强免疫力等营养功能。因此，很多婴幼儿配方乳粉中都会添加GOS。

目前，国内外针对GOS的检测方法有薄层色谱法、气相色谱法及高效液相色谱法（包括高效液相色谱-蒸发光散射法、高效液相色谱-示差检测器法及高效液相色谱-质谱法等），除以上方法外，还有离子色谱法，乳粉样品中GOS的检测主要以高效离子色谱法为主。其中，薄层色谱法需要制作薄层板，配制展开剂、显色剂等，操作繁杂，且定量准确性低。高效液相色谱法的样品前处理操作也很复杂，检测方法一般需要多种标准品，同时使用的质谱等检测器提高了检测成本。

本文采用离子色谱法对样品中低聚半乳糖进行含量测定。笔者采用英国365集团官网科技离子色谱仪配置安培检测器，氢氧化钠和水为淋洗液。该方法前处理简单，回收率好，灵敏度高，适用于样品中低聚半乳糖的检测。

关键词：低聚半乳糖；离子色谱法；安培检测器。

1.实验方法

1.1 仪器配置

表1 离子色谱系统配置清单

序号	名称	数量
1	IC6300离子色谱仪	1
2	PA20, 3×250mm	1

1.2 实验材料及辅助设备

水中半乳糖，1000mg/L；

水中葡萄糖，1000mg/L；

水中乳糖，1000mg/L；

磷酸二氢钾，磷酸氢二钾；

乙腈，色谱纯；

50%氢氧化钠溶液；

无水乙酸钠；

半乳糖苷酶：活性约150000U/g；

客户样品GOS；

一次性注射器（2mL）；

水系针式过滤器（0.22μm）；

万分之一电子天平；

实验用水为英国365集团官网超纯水净化器制备，电导率为18.25MΩ·cm（25℃）。

1.3 测试条件

表2 离子色谱条件

色谱柱	PA20, 3×250mm
淋洗液	200mM NaOH+乙酸钠，梯度淋洗
流速	0.4mL/min
运行时间	70 min
进样量	满环进样，20μL
柱温	30℃
检测区温	30℃
检测器	金电极,AAA-氨基酸，糖类，水溶性维生素

1.4 样品前处理

取样品适量，按照GB 1903.27-2022《食品安全国家标准食品营养强化剂低聚半乳糖》标准前处理样品，稀释合适的稀释倍数后过0.22μm水系滤头后上机测试。

2.结果与讨论

2.1 空白测试

图1 空白溶液谱图

2.2 线性测试

依次移取不同浓度的系列标准工作曲线，按照1.3工作测试条件得到标准曲线谱图多点重叠图如图2，线性方程见表4，三种糖在该色谱条件下线性相关系数R=0.999以上，线性良好。

表3 离子标曲数据

标准曲线系列梯度浓度表(μg/L)
组分名称	标曲1	标曲2	标曲3	标曲4	标曲5
半乳糖	0.5	1	2	5	10
葡萄糖	0.5	1	2	5	10
乳糖	0.5	1	2	5	10

图2 标准曲线重叠谱图

图3 半乳糖标准曲线

图4 葡萄糖标准曲线

图5 乳糖标准曲线

表4 标准曲线线性方程

序号	离子	线性方程	相关系数R
1	半乳糖	y=4107.57500x+438.01030	0.99938
2	葡萄糖	y=4956.41900x+762.55520	0.99903
3	乳糖	y=2942.84300x-506.00990	0.99994

2.3 样品含量测试

在1.3的工作测试条件下，对1.4的前处理后样品进行检测。样品图谱如图6、7和8所示，最终得到样品中低聚半乳糖的含量如表5所示。

图6 样A0测试谱图

图7 样A1测试谱图

图8 样A2测试谱图

表5 样品结果分析

2.3 重复性测试

在1.3的工作测试条件下，对标准品进行重复性测试。得到谱图多点重叠图如图9，检测结果见表6，可见重复性试验峰面积RSD为0.435%、0.503%、0.758%，保留时间RSD为0.790%、0.708%、0.729%。检测可靠，重复性良好。

图9 标准品重复性测试谱图

表6 标准品重复性结果

项目		半乳糖			葡萄糖			乳糖
序号	样品名称	保留时间(min)	峰面积(nC*s)	样品量mg/L	保留时间(min)	峰面积(nC*s)	样品量mg/L	保留时间(min)	峰面积(nC*s)	样品量mg/L
1	重复性-1	7.142	4789.293	1.059	8.008	5763.899	1.009	17.417	2700.905	1.090
2	重复性-2	7.158	4715.016	1.041	8.025	5688.403	0.994	17.442	2686.05	1.085
3	重复性-3	7.1	4797.288	1.061	7.967	5712.543	0.999	17.133	2674.474	1.081
4	重复性-4	7.125	4714.715	1.041	7.942	5755.955	1.007	17.217	2697.079	1.088
5	重复性-5	7.15	4724.525	1.044	7.975	5747.562	1.006	17.283	2650.43	1.073
6	重复性-6	7.192	4762.336	1.053	8.05	5663.547	0.989	17.442	2664.368	1.077
平均	/	7.144	4750.529	1.05	7.994	5721.985	1.001	17.322	2678.884	1.082
RSD (%)	/	0.435	0.79	0.861	0.503	0.708	0.801	0.758	0.729	0.606

3.结论

采用英国365集团官网科技IC6300智能离子色谱仪配置安培检测器，建立离子色谱法测定样品中的低聚半乳糖。样品通过前处理，然后经离子色谱柱分离，采用外标法定量，能够对样品中的低聚半乳糖进行定性、定量分析，该方法简单易行，重复性好，灵敏度、准确度均能达到要求，可采用此方法进行样品中低聚半乳糖的含量测定。

下载解决方案