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英国365集团官网LCMS-TQ9200测定鸡肉中酰胺醇类抗生素残留，助力食品安全

方案概述

前言：

酰胺醇类抗生素（Chloramphenicols，CAPs）是一类具有广谱抗菌活性的药物，代表性药物包括氯霉素、甲砜霉素及氟苯尼考。其核心药理作用在于不可逆结合细菌核糖体50S亚基的肽酰转移酶中心，阻断肽链延伸，从而高效抑制细菌蛋白质合成（作用机制）。该特性使其对革兰氏阴性菌（如沙门氏菌、大肠杆菌）及部分阳性菌（如链球菌）均表现出显著抑菌活性。在兽药使用方面，因成本低廉、组织穿透力强（尤其对血脑屏障和血眼屏障），酰胺醇类广泛用于畜牧业，治疗猪、牛以及禽类的呼吸道疾病（如猪胸膜肺炎、牛巴氏杆菌病）、消化道感染及神经系统感染。然而，因其超范围与超剂量用药、忽视休药期、代谢复杂性以及交叉污染等因素，兽药残留问题日益严峻。残留导致的健康危害具有遗传毒性、肝肾损伤、耐药性危机以及母婴风险等多维风险，因此对动物源性食品中酰胺醇类抗生素药物残留的检测已成为兽药研发以及食品安全控制中必不可少的重要环节。

我国食品安全国家标准《GB 31650-2019食品中兽药最大残留限量》中规定部分酰胺醇类抗生素动物源食品中的兽药最大残留量，其中氯霉素作为食品中禁止检出药物；同时食品安全国家标准《GB 31658.20-2022 食品安全国家标准动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》中规定了4种酰胺醇类液质检测方法。本应用方案成功验证了英国365集团官网LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统满足鸡肉中4种酰胺醇类抗生素残留的检测方法要求。

关键词：液相色谱串联质谱；酰胺醇；食品安全；兽药残留

1.仪器设备及试剂

1.1液相串联质谱配置清单

表1 仪器配置清单表

序号	名称	数量
1	LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统	1台
2	P3600B 二元高压恒流泵	1台
3	CT3600 柱温箱	1台
4	AS3600 超高效自动进样器	1台
5	SmartLab CDS 2.0色谱使用工作站	1套

1.2试剂及标准品清单

表2 试剂及标品清单表

序列	试剂及标准品	纯度
1	甲醇	LC-MS级
2	乙腈	LC-MS级
3	甲酸	LC-MS级
4	氨水	分析纯
5	乙酸乙酯	分析纯
6	正己烷	分析纯
7	氯化钠	分析纯
8	氟苯尼考胺	99%
9	氟苯尼考胺-D3	99%
10	氯霉素	99%
11	氯霉素-D5	99%
12	甲砜霉素	99%
13	甲砜霉素-D3	99%
14	氟苯尼考	99%
15	氟苯尼考-D3	99%

1.3实验材料及辅助设备

超声波清洗机；

涡旋混合器；

水浴氮吹仪；

高速离心机。

2.实验方法

2.1溶液配制

2.1.1 2%氨化乙酸乙酯溶液：取氨水4 mL，用乙酸乙酯稀释到200 mL。

2.1.2 4%氯化钠溶液：取氯化钠4 g，用水溶解并稀释到100 mL。

2.1.3 4%氯化钠饱和的正己烷溶液：取适量的4%氯化钠溶液，加入过量的正己烷，混合，静置分层，取上层正己烷。

2.1.4 混合内标工作液：取适量的混合内标母液，20%甲醇稀释到氯霉素-D5 10 ng/mL，其他内标（氟苯尼考-D3、甲砜霉素-D3和氟苯尼考胺-D3）为50 ng/mL。

2.2样本前处理

2.2.1样本提取

称取样品2 g(准确至±0.01g)，加混合内标工作液100 µL，涡旋1 min，涡旋混匀，加2%氨化乙酸乙酯溶液10 mL，涡旋震荡10 min，8000 rpm离心5 min，取上清液，残渣加2%氨化乙酸乙酯溶液10 mL，重复上述步骤提取一遍。合并两次上清液，于50℃氮气吹干，备用。

2.2.2样本净化

取净化残渣加4%氯化钠溶液3 mL涡旋使其溶解，再加4%氯化钠饱和的正己烷溶液5 mL，涡旋30 s，8000 rpm离心5 min，弃去上层正己烷层，再重复脱脂一次。加2%氨化乙酸乙酯溶液5 mL，涡旋震荡10 min，8000 rpm离心5 min，取上清液，残渣加2%氨化乙酸乙酯溶液5 mL，重复上述步骤提取一遍。合并上清液，于50℃氮气吹干，加20%甲醇溶液1 mL涡旋30s，过滤膜，待上机。

2.3实验条件

2.3.1液相方法条件

色谱柱：C18 1.7μm 2.1x50mm

流动相：A相：乙腈；B相：2 mM甲酸铵水

流速：0.3 mL/min

柱温：40 ℃

进样体积：5 µL

2.3.2质谱方法条件

表3 质谱离子源参数

离子源	参数
离子源电压	ESI+5000 V/ -4000 V
脱溶剂气流速	15000 mL/min
雾化气流速	2000 mL/min
气帘气流速	5000 mL/min
碰撞气流速	800 μL/min
脱溶剂气温度	500 ℃
气帘气温度	150 ℃

3实验结果

3.1标准品谱图

6分钟内完成4种酰胺醇抗生素及内标的测定，各峰均有良好的峰形，无峰形拖尾现象，各化合物响应良好，符合实验测定需求。

图1 4种酰胺醇类抗生素及内标色谱图

（氯霉素 0.2 ng/mL,其他抗生素1 ng/mL）

3.2线性范围

取适量酰胺醇类混合标准溶液，逐级稀释到系列浓度制作标准曲线，线性范围氯霉素0.2-10 ng/mL，氟苯尼考胺、甲砜霉素和氟苯尼考1-50 ng/mL，线性检测结果与已知浓度的偏差小于最大允许偏差，R²范围在0.9958~0.9998之间，各组分线性关系良好。

表4各化合物线性范围表

化合物	线性范围	回归方程	线性相关系数R²
氟苯尼考胺	1-50 ng/mL	Y=0.215X-0.005	0.9998
氯霉素	0.2-10 ng/mL	Y=3.476X+0.112	0.9994
甲砜霉素	1-50 ng/mL	Y=1.150X-0.055	0.9958
氟苯尼考	1-50 ng/mL	Y=0.2658X+0.2175	0.9978

图2 4种化合物线性结果

3.3检测限与定量限

食品安全国家标准GB 31658.20-2022中规定本方法氯霉素的检测限为0.1µg/kg，定量限为0.2 µg/kg；甲砜霉素、氟苯尼考、氟苯尼考胺的检测限为0.5 µg/kg，定量限为1 µg/kg。本方法中各化合物在检测限与定量限规定浓度下信噪比远大于3和10，符合国标中灵敏度要求。

表5 各化合物检测限与定量限

化合物	信噪比（S/N）
化合物	检测限	定量限
氟苯尼考胺	33.30	71.43
氯霉素	66.91	185.57
甲砜霉素	74.32	257.56
氟苯尼考	136.55	386.17

图3 4种化合物检测限与定量限色谱图

3.4精密度测试

取低中高三种浓度酰胺醇类标准物质混合溶液，连续进样6针比较保留时间与峰面积偏差，结果如下表所示，所有酰胺醇类化合物保留时间偏差均小于1%，峰面积偏差均小于5%，符合国标的RSD≤15%的精密度要求。

表6 各化合物精密度测试

化合物	浓度(ng/mL)	保留时间偏差RSD(%，n=6)	峰面积偏差 RSD(%，n=6)
氟苯尼考胺	2	0.65	1.72
	5	0.75	1.40
	10	0.65	1.08
甲砜霉素	2	0.20	3.31
	5	0.25	4.84
	10	0.31	4.39
氟苯尼考	2	0.29	4.01
	5	0.29	4.26
	10	0.18	4.39
氯霉素	0.4	0.28	3.18
	1	0.18	2.51
	2	0.25	2.48

图4 4种酰胺醇类化合物精密度色谱图

3.5基质加标回收率测试

采用加标回收试验评估该检测项目的正确度：测定各检测指标的浓度，将已知浓度的标准品按不同比例加到空白基质样品中进行前处理，制作高、中、低三个不同浓度的基质加标样品。每个浓度的加标样品独立测定6次，通过检测加标前后基质中的浓度，计算回收率，评估该项目的准确度。结果如下所示：鸡肉基质中各化合物加标回收率在94.5-107.2%之间，CV在5%以内，准确度符合方法要求。

表6 鸡肉基质中各化合物加标回收率

化合物	加标量(ng/mL)	测得量（ng/mL）	平均回收率（%，n=6）	CV（%，n=6）
氟苯尼考胺	2	2.04	101.80	3.92
	5	4.99	99.83	1.20
	10	9.45	94.48	3.41
甲砜霉素	2	2.01	100.54	4.05
	5	5.16	103.15	2.53
	10	9.76	97.60	4.44
氟苯尼考	2	2.02	100.96	2.84
	5	5.25	105.00	2.47
	10	10.72	107.23	1.82
氯霉素	0.4	0.41	102.00	2.85
	1	1.02	101.82	3.96
	2	2.09	104.28	4.54

3.6样品测试

公司附近超市随机购买鸡胸肉样品，经上述样品前处理方法提取、净化，样品上机测试，4种酰胺醇类抗生素均未检出。

图5 超市鸡胸肉样品中4种酰胺醇类化合物色谱图

4结论

本方法使用英国365集团官网LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统，进行动物源食品中酰胺醇类抗生素的测定，正负离子模式化合物可同时采集。由数据可得该方法的各色谱峰峰形良好、无拖尾，灵敏度符合国标要求，线性相关系数均大于0.99，连续6针各化合物保留时间偏差在1%以内，峰面积偏差均在5%以内，精密度良好；鸡肉基质加标回收率在94.5-107.2%之间，CV在5%以内，准确度符合方法要求；超市随机购买鸡胸肉样品，上机测试4种酰胺醇类抗生素均未检出。说明了该方法配备英国365集团官网液相色谱串联质谱系统满足对待测样本的常规性定性定量检测需求。

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