方案概述
前言：
乙基麦芽酚作为一种高效、广谱的香味增效剂和改良剂，被广泛应用于食品工业中，以增强和调和食品的甜香、果香及奶香风味。根据我国《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760-2024），乙基麦芽酚被允许在特定食品类别中按生产需要适量使用。然而，由于其能够显著掩盖油脂可能存在的氧化异味并提升口感，近年来在食用植物油（包括大豆油）中违规添加乙基麦芽酚的现象时有发生。因此，建立一种准确、灵敏、高效的分析方法，用于监控大豆油等食用油中乙基麦芽酚的非法添加，对保障食品安全、维护消费者权益和市场规范具有重要的现实意义。
食用植物油中乙基麦芽酚的测定（BJS201708）规定了食用植物油中乙基麦芽酚的液相色谱-串联质谱定性确证和定量测定方法，适用于芝麻油、芝麻调和油、菜籽油等食用植物油中乙基麦芽酚的确证及测定。
大豆油基质成分复杂，主要含有甘油三酯、游离脂肪酸、磷脂及天然生育酚等物质，这些共存成分在分析过程中极易对目标物乙基麦芽酚的检测产生严重的基质干扰。液相色谱-串联质谱联用技术结合了液相色谱卓越的分离能力与串联质谱高选择性、高灵敏度的检测优势。该技术已成为当前食品中痕量非法添加物分析鉴定的强有力工具。
本应用方案成功验证英国365集团官网LCMS-TQ9200三重四极杆液质联用系统分析大豆油中的乙基麦芽酚含量的结果。
关键词：三重四极杆液质联用系统；大豆油；乙基麦芽酚
1.仪器设备及试剂
1.1液相串联质谱配置清单
表1 仪器配置清单表
序号 | 名称 | 数量 |
1 | LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统 | 1台 |
2 | P3600B 二元高压恒流泵 | 1台 |
3 | CT3600 柱温箱 | 1台 |
4 | AS3600 超高效自动进样器 | 1台 |
5 | SmartLab CDS 2.0色谱使用工作站 | 1套 |
6 | BEH C18 1.7 μm 2.1x50 mm | 1个 |
1.2试剂及标准品清单
表2 试剂及标品清单表
序列 | 试剂及标准品 | 纯度 |
1 | 甲醇 | LC-MS级 |
2 | 甲酸 | LC-MS级 |
3 | 乙基麦芽酚标准溶液 | 100 mg/L |
4 | 某品牌大豆油 | 1 kg |
1.3实验材料及辅助设备
超声波清洗机；
涡旋混合器；
高速离心机
2.实验方法
2.1液相方法条件
色谱柱：C18, 1.7 µm 2.1x50mm
流动相：A相：0.1% 甲酸水；B相：0.1% 甲酸甲醇
流速：0.3 mL/min
柱温：40 ℃
进样体积：2 µL
2.2前处理方法
准确称取10g试样（精确至0.01g）置于50mL聚丙烯离心管中，用移液器准确加入10mL甲醇，涡旋振摇2min，4℃条件下9000rpm/min 离心10 min，将上清液移入20mL具塞刻度试管中，下层油液再用10mL甲醇重复提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20mL，经微孔滤膜（0.22 µm，有机相）过滤，供液相色谱-串联质谱分析。
2.3溶剂配制
2.3.1 乙基麦芽酚标准溶液：100µg/mL，上海安谱实验科技股份有限公司有限公司购得。
2.3.2 乙基麦芽酚标准系列工作溶液：将乙基麦芽酚标准储备溶液用甲醇逐级稀释成 1.25µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、25µg/mL、50µg/mL 标准系列溶液，准确称取与试样基质相应的阴性试样10g（精确至0.01g），分别加入标准系列溶液200µL，与试样同时进行提取，制成最终浓度为12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL 标准系列工作溶液。临用时配制。
2.3.3 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（0.22µm，水相）过滤后备用。
2.3.4 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1mL用甲醇稀释至1000mL，用滤膜（0.22µm，有机相）过滤后备用。
3实验结果
3.1标准品谱图
7分钟内完成乙基麦芽酚含量的测定，峰形良好，化合物响应良好，符合实验测定需求。
图1 乙基麦芽酚色谱图（250 ng/mL）
3.2线性范围
取乙基麦芽酚标准溶液，逐级稀释到系列浓度制作标准曲线，线性范围12.5~500 ng/mL，线性检测结果与已知浓度的偏差小于最大允许偏差，R²均大于0.9999，线性关系良好。
表3 化合物线性范围表
化合物 | 线性范围 | 线性相关系数R2 |
乙基麦芽酚 | 12.5~500 ng/mL | 0.99997 |
图2 化合物线性结果
3.3检测限与定量限
本方法中乙基麦芽酚在12.5ng/mL信噪比远大于10。其中当S/N等于10，为理论定量限，S/N等于3，为理论检出限，经计算，其检出限为1.07ng/mL，定量限为3.56ng/mL。
表4 化合物定量限与检出限
化合物 | 信噪比（S/N） | 检出限（ng/mL） | 定量限（ng/mL） |
乙基麦芽酚 | 35.079 | 1.07 | 3.56 |
 |
图3 化合物定量限色谱图
3.4精密度
取空白溶剂及阴性试样加入乙基麦芽酚标准溶液，使其最终浓度为25 ng/mL，连续进样7针比较精密度；结果如下表所示，乙基麦芽酚RSD均在3%以内，符合标准的≤15%的精密度要求。
表5 化合物精密度
化合物 | 样品 | 偏差RSD |
乙基麦芽酚 | 甲醇加标 | 2.407% |
大豆油加标 | 2.915% |
图4 甲醇加标精密度色谱图
图5 大豆油加标精密度色谱图
3.5回收率
取100µg/mL乙基麦芽酚标准溶液，使用大豆油稀释至25ng/mL，前处理提取后过滤，连续进样7针比较回收率；结果如下表所示，乙基麦芽酚回收率为102.53%，符合80%-120%的回收率要求。
表6 化合物回收率
化合物 | 加标浓度(ng/mL) | 回收率% |
乙基麦芽酚 | 25 | 102.53% |
3.6空白残留
取标准曲线最高点500ng/mL后进样空白试剂，计算其空白残留未检出。
图6 空白残留色谱图
3.7样品测试
取某品牌大豆油经过前处理后进样，未检出。
图7 样品测试色谱图
4.结论
本方法使用英国365集团官网LCMS-TQ9200液相质谱联用系统，进行食醋中的甜蜜素测定。由数据可得该方法的各色谱峰峰形良好、无拖尾，灵敏度符合要求，线性相关系数均大于0.9999，精密度在3%以内，加标回收率在85-105%之间，高浓度样本系统无残留，说明了该方法配备英国365集团官网液相色谱质谱联用系统满足对待测样本的常规性定性定量检测需求。
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