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方案概述

前言：

双氰胺，又称二氰二胺、氰基胍，是一种重要的有机化工原料。它是氰胺的二聚体，常温下呈现为白色结晶粉末，干燥状态下性质稳定，微溶于水，易溶于热水及极性有机溶剂双氰胺是一种高效的硝化抑制剂。施入土壤后，它能抑制硝化细菌的活性，延缓铵态氮向硝态氮的转化速度。这一特性有助于减少氮肥的淋溶流失和挥发损失，提高肥料利用率，同时减少因硝酸盐积累对地下水造成的污染。在新西兰等地，双氰胺曾被广泛用于牧场肥料中。

正丁基硫代磷酸三胺，又称NBPT，是一种高效土壤脲酶抑制剂，常温下为白色结晶或粉末。它通过竞争性抑制脲酶活性，延缓尿素在土壤中的水解，使氮素释放与作物需肥周期更同步。作为肥料增效剂，按特定比例添加于尿素中，可减少氨挥发40%-60%，将氮肥利用率提升至50%以上。在土壤中半衰期约7-8天，最终降解为铵、硫酸根、磷酸根等物质。

本次试验参考《肥料中正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺同时测定高效液相色谱法》（GB/T 46742-2025），采用英国365集团官网高效液相色谱仪LC3400系列配置紫外检测器进行检测。试验结果显示，目标峰型良好，理论塔板数高；在1.0~100.0μg/mL浓度范围内，正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺的线性相关系数R值均在 0.9999以上；正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺标准品（浓度10.0μg/mL）连续进样6针，保留时间重复性为0.048%和0.020%、峰面积重复性为0.165%和0.187%，仪器精密度良好；在样品中添加2.0μg/mL的标准品浓度，正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺的回收率分别为86.50%和88.89%，回收率良好；正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺的检出限理论结果分别为4.692ng/mL和0.481ng/mL；某肥料样品测试检出双氰胺，检出量为0.05μg/mL，但未检测出正丁基硫代磷酰三胺。以上数据均满足药典方法对于仪器的要求。

关键词：肥料；双氰胺；正丁基硫代磷酰三胺；高效液相色谱法。

1.仪器设备及试剂

1.1 液相配置清单

表1 高效液相色谱系统配置清单

序号	名称	数量
1	UV3400 紫外检测器	1台
2	P3400B 二元高压恒流泵	1台
3	CT3400 柱温箱	1台
4	AS3400 全自动进样器	1台
5	SmartLab CDS 2.0色谱工作站	1套

1.2 试剂及标准品清单

表2 试剂及标品清单表

序列	试剂及标准品	纯度
1	乙腈	HPLC级
2	正丁基硫代磷酰三胺标准品	-
3	双氰胺标准品	-

1.3 液相色谱条件

表3 高效液相色谱条件

色谱柱	C18 4.6×250mm，5μm色谱柱
流速	1.0mL/min
柱温	40℃
流动相	流动相A：水；流动相B：乙腈
波长	214nm
进样量	10μL

1.4 实验材料及辅助设备

超声波清洗机；

分析天平。

2.实验方法

2.1 溶液配制

2.1.1 标准曲线溶液：准取称取DCD和NBPT标准品适量，用水配制成质量浓度为1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL和100.0μg/mL的标准系列溶液；

2.1.2 试样溶液：取肥料1g，置250mL容量瓶中，加入100mL水，超声20min，冷却至室温，再用水稀释至刻度，摇匀，平行试样两份；

2.1.3 回收率溶液：取肥料1g，置250mL容量瓶中，加入100mL水和适量的标准品溶液，超声20min，冷却至室温，再用水稀释至刻度，摇匀。

3.实验结果

3.1 线性与范围

表4 标准曲线浓度表

组分名称	浓度（μg/mL）
组分名称	标曲1	标曲2	标曲3	标曲4	标曲5	标曲6
正丁基硫代磷酰三胺（NBPT）	1.0	5.0	10.0	25.0	50.0	100.0
双氰胺（DCD）	1.0	5.0	10.0	25.0	50.0	100.0

图1 双氰胺标准曲线图

图2 正丁基硫代磷酰三胺标准曲线图

说明：取适量正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺标准溶液，逐级稀释到系列浓度制作标准曲线，线性范围1.0~100.0μg/mL，正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺标准品线性相关系数R值均在0.9999以上，组分线性良好。

3.2 精密度

图3 标准品精密度测试叠加图（10.0μg/mL）

表5 标准品精密度测试数据（10.0μg/mL）

化合物名称	保留时间（min）	峰面（mAU*s）	化合物名称	保留时间（min）	峰面（mAU*s）
DCD	2.607	979.227	NBPT	14.030	128.614
	2.607	979.560		14.030	128.514
	2.608	978.994		14.024	128.491
	2.608	977.593		14.012	128.219
	2.608	976.636		14.027	128.149
	2.608	974.853		14.026	128.127
平均值	2.608	977.81	平均值	14.025	128.352
SD	0.001	1.824	SD	0.007	0.212
RSD（%）	0.020	0.187	RSD（%）	0.048	0.165

说明：正丁基硫代磷酰三胺和双氰胺标准品（浓度10.0μg/mL）连续进样6针，保留时间重复性为0.048和0.020%和峰面积重复性为0.165%和0.187%，仪器精密度良好。

3.3 回收率

图4 肥料中DCD和NBPT回收率测试叠加图

表6 肥料中DCD和NBPT回收率测试数据

化合物名	样品名称	A	回收率（%）
DCD	样品	35.508	-
	加标样品	210.823	-
	标准品-2ppm	197.231	88.89
NBPT	样品	-	-
	加标样品	22.520	-
	标准品-2ppm	26.034	86.50

说明：在样品中添加2.0μg/mL的标准品浓度，按照上述方法进行分析，DCD和NBPT的回收率为88.89%和86.50%，回收率良好。

3.4 检出限

图5 DCD和NBPT标准品测试谱图（1.0μg/mL）

表7 DCD和NBPT标准品测试数据（1.0μg/mL）

化合物名	保留时间（min）	峰面积（mAU*s）	信噪比	噪声（mAU）
DCD	2.606	98.517	6230.650	0.006
NBPT	14.029	12.801	639.436	0.006

说明：根据上表DCD和NBPT标准品（1.0μg/mL）测试数据，3倍信噪比为检出限计算可知DCD和NBPT的检出限理论结果分别为0.481ng/mL和4.692ng/mL。

3.5 某肥料测试

图6 某饲料测试谱图

说明：某肥料中检出DCD，检出量为0.05μg/mL，但未检测出NBPT。

4.结论

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