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预防食品安全 “隐形杀手” ！英国365集团官网液相色谱串联质谱系统测定赭曲霉毒素A

方案概述

前言：

赭曲霉毒素 A（OTA）是由赭曲霉、青霉属等真菌产生的一类毒性极强的真菌毒素，广泛污染全球谷物、坚果、咖啡、葡萄酒等多种食品，尤其在小麦、玉米、大麦及相关制品中检出率居高不下，是食品安全领域重点防控的 “隐形杀手”。

赭曲霉毒素 A的毒性机制堪称 “多维度攻击”，危害覆盖多器官且极具隐匿性：其强肾毒性位居真菌毒素前列，长期摄入会导致肾小管损伤、肾功能进行性衰退，甚至诱发慢性肾病与肾癌，是泌尿系统的 “慢性毒药”；同时，国际癌症研究机构已将其列为2B 类致癌物，明确的致癌性、致畸性与致突变性，会破坏细胞 DNA 稳定性，显著增加长期暴露人群的患癌风险。

为精准防控赭曲霉毒素 A带来的食品安全风险，本应用方案依托英国365集团官网LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统，建立了赭曲霉毒素 A液相色谱-串联质谱检测方法。该方法前处理高效便捷、准确性高、线性良好，可实现食品中赭曲霉毒素 A的快速分离与精准定量，为食品中此类毒素的检测提供可靠技术支持。

关键词：真菌毒素；赭曲霉毒素A；液相色谱-串联质谱；食品安全。

1.仪器设备及试剂

1.1 仪器配置

表1 仪器配置清单表

序号	名称	数量
1	LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统	1台
2	P3600B 二元高压恒流泵	1台
3	CT3600 柱温箱	1台
4	AS3600 超高效自动进样器	1台
5	SmartLab CDS 2.0色谱工作站	1套
6	C18 2.7 μm 2.1x100 mm	1个

1.2 试剂及标准品清单

表2 试剂及标品清单表

序列	试剂及标准品	规格
1	乙腈	LC-MS级
2	甲酸	LC-MS级
3	甲酸铵	LC-MS级
4	乙酸	LC-MS级
5	乙酸铵	LC-MS级
6	赭曲霉毒素A	100 ppm

1.3 实验材料及辅助设备

涡旋混合器；

高速离心机；

分析天平；

摇床。

2.实验方法

2.1 溶液配制

2.1.1 乙腈-水-乙酸（70:29:1，v:v:v）：量取10mL乙酸和290 mL水加入到700 mL乙腈中，混匀。

2.1.2 乙腈-乙酸（99:1，v:v）：量取10mL乙酸加入到990 mL乙腈中，混匀。

2.1.3 0.1%甲酸+5mM甲酸铵-95%乙腈水溶液:精确称取 0.315 g甲酸铵，溶解于50 mL水中，加1mL甲酸，用乙腈定容至1000 mL，混匀。

2.1.4 0.1%甲酸-5mM甲酸铵水：精确称取 0.315 g甲酸铵，用0.1%甲酸水溶液溶解并稀释至1000 mL。

2.1.5 5mM 乙酸铵溶液：精确称取0.385 g乙酸铵，用水溶解并稀释至1000 mL。

2.2 样本前处理

2.2.1 样品提取

2.2.1.1 小麦粉提取

取小麦粉过2 mm孔径试验筛，称取2ｇ试样（精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入8 mL乙腈-水-乙酸（70：29：1，v：v：v），涡旋混匀，摇床中振荡30 min，在8000 r/min下离心5 min，取上清液，加入等体积的 5mM 乙酸铵溶液，振荡混匀，过0.22 µm PTFE滤膜，待进样。

2.2.1.2 啤酒提取

称取2ｇ啤酒试样(含二氧化碳的酒类样品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min，过滤或超声脱气，精确至0.01 g）于50 mL离心管中，加入6 mL乙腈-乙酸（99：1，v：v），涡旋混匀，摇床中振荡30 min，在8000 r/min下离心5 min，取上清液，加入等体积 5mM 乙酸铵溶液，振荡混匀，过0.22 µm PTFE滤膜，待进样。

2.3 实验条件

2.3.1 液相方法条件

色谱柱：C18 2.7 μm 2.1x100 mm；

流动相：A相： 0.1%甲酸-5mM甲酸铵水；B相：0.1%甲酸+5mM甲酸铵-95%乙腈水溶液；

柱温：40 ℃；

进样体积：2 µL。

2.3.2 质谱方法条件

表3 化合物质谱参数

化合物名称	前体离子(m/z)	产物离子(m/z)	碰撞能量CE
赭曲霉毒素A	402.1	358.1*	-28
赭曲霉毒素A	402.1	166.9	-50

注：带*为定量离子

3.实验结果

3.1 标准品谱图

5分钟内完成赭曲霉毒素A的检测，如图1 化合物峰有良好的峰形，其响应良好，符合实验测定需求。

图1 赭曲霉毒素A的色谱图

3.2 线性范围

准确移取适量赭曲霉毒素A标准工作溶液，用空白样品提取液配制成标准曲线，线性范围为0.5-100 ng/mL，其线性结果与已知浓度的偏差小于最大允许偏差，R²大于0.999，线性关系良好。

图2 小麦粉基质-赭曲霉毒素A标准曲线

图3 啤酒基质-赭曲霉毒素A标准曲线

3.3 定量限与检出限

本方法以0.5 ng/mL、1 ng/mL分别作为赭曲霉毒素A的检出限和定量限，其信噪比如下表，检出限信噪比均大于3，定量限信噪比均大于10。

表4定量限与检出限

化合物名称	检出限信噪比（0.5 ng/mL）	定量限信噪比（1 ng/mL）
小麦粉基质	25.20	43.89
啤酒基质	13.54	27.50

3.4 重复性

取1、5、50 ng/mL三种浓度标准溶液，连续进样6针。结果如下表所示，高中低浓度赭曲霉毒素A保留时间，峰面积的相对标准偏差均在5%以内，满足实验要求。

表5 高中低浓度赭曲霉毒素A重复性测试

基质类型	浓度(ng/mL)	峰面积RSD（%）	保留时间RSD（%）
小麦粉基质	1	2.622	0.368
	5	1.338	0.317
	50	0.671	0.755
啤酒基质	1	4.727	0.565
	5	1.210	0.354
	50	0.694	0.356

3.5 加标回收

在小麦粉，啤酒中加入标准溶液，使赭曲霉毒素A浓度增加5 ng/mL，进液质测试，连续6针进样测试，回收率和RSD均符合实验要求。

表6 回收率

基质类型	回收率	RSD
小麦粉基质	109.12%	1.82%
啤酒基质	96.54%	1.29%

3.6 空白残留

在进样100 ng/mL标液后，进样一针基质空白，计算空白残留，结果如下图，空白残留未检出。

图4 小麦粉基质空白色谱图

图5 啤酒基质空白色谱图

3.7 样品测定

样A-小麦粉，样B-啤酒中均未检出赭曲霉毒素A。

图6 样A-小麦粉的赭曲霉毒素A色谱图

图7 样B-啤酒的赭曲霉毒素A色谱图

4.结论

本方法使用英国365集团官网LCMS-TQ9200液相色谱串联质谱系统建立赭曲霉毒素A液相色谱-串联质谱法检测方法。由数据可得该方法的各色谱峰峰形良好、无拖尾，灵敏度符合实验要求，R²均大于0.999，符合线性要求，高中低浓度的重复性在5%以内，高浓度样本无系统残留，说明了该方法配备英国365集团官网液相色谱质谱联用系统满足对待测样本的常规性定性定量检测需求。

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